COMPARACIÓN DE TRES MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DE ADN PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS PATÓGENAS EN QUESOS

Resumen

La inocuidad de los alimentos es la ausencia, o niveles seguros y aceptables, de peligro en los alimentos
que pueden dañar la salud de los consumidores. Los peligros transmitidos por los alimentos pueden ser de
naturaleza microbiológica, química o física. Se sabe que alrededor de 40 diferentes patógenos de origen
alimentario causan enfermedades humanas. Más del 90% de los casos confirmados y las muertes causadas
por dichos patógenos han sido atribuidos a bacterias. Entre las bacterias más comunes se
encuentran Clostridium botulinum, Escherichia coli, Salmonella spp., Listeria monocytogenes, Yersinia
enterocolitica, Staphylococcus aureus, Shigella spp., Bacillus cereus y Campylobacter jejuni. No obstante,
aproximadamente el 98% de los microorganismos encontrados en los productos alimenticios no son
patógenos. Por esta razón, se requiere desarrollar pruebas de diagnóstico que puedan detectar
específicamente los microorganismos de interés. Tradicionalmente, la identificación de microorganismos en
laboratorio se ha llevado a cabo de manera rutinaria mediante el aislamiento del microorganismo problema
y la observación de sus características fenotípicas expresadas, como su morfología, comportamiento
bioquímico y metabolismo [1] . Sin embargo, esta metodología presenta varias limitaciones, por ejemplo, el
tiempo para obtener resultados o la dificultad que presentan algunos microorganismos para ser cultivados,
como es el caso de los microorganismos extremófilos o las bacterias denominadas viables no cultivables.
La constante actualización de los métodos moleculares y de análisis génico conlleva la necesidad de
desarrollar métodos de extracción de ADN que sean simples, eficientes y de bajo costo. La identificación de
microorganismos a través de técnicas moleculares es actualmente la más utilizada gracias a su precisión.
La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una técnica de diagnóstico molecular sumamente
valorada por su rapidez de resultados, alta sensibilidad y especificidad; sin embargo, el desempeño de la
PCR depende fundamentalmente de la calidad de la muestra a analizar, es decir del ADN, el cual, debe ser
de alta calidad y pureza. Por esta razón, son necesarias técnicas especializadas y estandarizadas para su
extracción. Existe una cantidad considerable de metodologías de extracción de ADN bacteriano, algunas de
ellas utilizan altas concentraciones de sales para la lisis celular, resinas quelantes que no requieren una
digestión previa con enzimas como la proteinasa K y la metodología fenol-cloroformo o extracción con
solventes orgánicos que se fundamenta en la lisis celular y la eliminación de restos proteicos y lipídicos
presentes junto con los solventes. Esta diversidad permite seleccionar la técnica que mejor se ajuste a las
necesidades de cada investigador teniendo en cuenta varios factores, como la matriz de la muestra, material
con que se cuenta para realizar la extracción y la cantidad de ADN requerida para los estudios.
El objetivo de esta investigación fue evaluar tres métodos de extracción de ADN de cultivos de E. coli, S.
aureus, Salmonella spp y L. monocytogenes con respecto al rendimiento, pureza y calidad del producto. Los
métodos fueron: tratamiento térmico, método de CTAB (bromuro de cetiltrimetilamonio) y un kit comercial
que digiere el ARN y separa las proteínas por precipitación con sales (Wizard Genomic DNA Purification
Kit).